miercuri, 22 februarie 2023
OMS va rămâne un organ consultativ.Organizația Mondială a Sănătății a renunțat la amendamentele propuse la Regulamentul sanitar internațional privind vaccinarea obligatorie și închiderea. Este o victorie, însă tratatul privind pandemia, care ar face același lucru, încă așteaptă în culise.
într-o victorie rară, Organizația Mondială a Sănătății a renunțat la amendamentele propuse la Regulamentul sanitar internațional privind vaccinarea obligatorie și închiderea. Este o victorie, însă tratatul privind pandemia, care ar face același lucru, încă așteaptă în culise.
Transcriere
Săptămâna aceasta reprezintă o victorie rară pentru suveranitatea australiană.
O victorie pentru bunul simț, decență și umanitate.
Și o victorie împotriva monstrului tentacular al birocraților străini nealeși și lipsiți de răspundere de la Organizația Mondială a Sănătății.
Vă amintiți că OMS a propus schimbarea regulamentelor de sănătate care ghidează statele membre în caz de apariție a unei boli, cum ar fi COVID, de la a ghida statele membre la a fi obligatorii pentru statele membre, inclusiv pentru Australia.
Acest lucru ar fi reprezentat o distrugere completă a suveranității australiene și o reimaginare fundamentală a puterilor Organizației Mondiale a Sănătății.
În decembrie anul trecut, guvernul liberal/național Morrison a votat în favoarea acestor modificări, însă multe țări sensibile au votat împotrivă, iar propunerea a fost pierdută.
Neînfricată, Organizația Mondială a Sănătății a încercat din nou anul acesta.
După luni de critici dure, One Nation și cei care se opun acestor măsuri au obținut o mare victorie.
Raportul final al Comitetului de revizuire a Regulamentului sanitar internațional, publicat săptămâna aceasta, a renunțat la modificările propuse.
Organizația Mondială a Sănătății va rămâne un organism consultativ.
Cererile distopice, cum ar fi aceea de a permite Organizației Mondiale a Sănătății să emită ordine sanitare obligatorii care să prevaleze asupra controlului statal și federal, au fost respinse.
Aceasta include competențele propuse care ar fi permis OMS să controleze:
sistemele de dovadă a vaccinării sau a statutului de vaccinare,
procedurile de carantină,
călătoriile și mobilitatea cetățenilor,
vaccinarea forțată,
închiderile,
închideri,
detenția obligatorie și,
alte încălcări inacceptabile ale drepturilor persoanelor.
A dispărut "pașaportul de sănătate" universal - sau pașaportul pentru vaccinuri - care urma să controleze capacitatea cetățenilor de a călători între țări în mod permanent.
S-a decis că acest lucru ar ridica probleme "etice" și "discriminatorii". Un pașaport global digital pentru vaccinuri nu va mai fi dezvoltat în cadrul competențelor comitetului.
Deocamdată.
Comitetul va rămâne limitat la urgențele reale de sănătate publică, mai degrabă decât la "riscuri potențiale pentru sănătate" - eliminând astfel teama larg răspândită că domeniul de aplicare al acestuia ar putea fi extins la "blocaje climatice" și alte abuzuri ale drepturilor omului.
Ceea ce ar fi fost posibil deoarece OMS a propus eliminarea drepturilor omului din regulamente.
În urma unei reacții negative, comitetul recomandă acum cu tărie păstrarea textului existent, care citează "respectarea deplină a demnității, a drepturilor omului și a libertăților fundamentale ale persoanelor ca principiu general".
Aceasta este o revenire critică.
Comitetul OMS care a lucrat la aceste modificări tocmai și-a reafirmat angajamentul privind drepturile fundamentale ale omului, sfidând modificările propuse.
Constatările comisiei au fost de acord cu preocupările exprimate de One Nation cu privire la amenințarea suveranității.
În raportul lor final, comisia a declarat că, citez: "îngrijorată de faptul că propunerile ar putea afecta în mod nejustificat suveranitatea statelor părți" și că recomandările ar putea fi "obligatorii" în loc să fie voluntare.
În cele din urmă, comisia a validat temerile exprimate pe scena internațională și în cadrul presei libere.
Temeri pe care le-am exprimat și pentru care am fost numit teoretician al conspirației.
Am avut dreptate.
Decizia lor de a respinge această încercare de a lua puterea de la guvernele suverane este un prim pas crucial pentru a împiedica birocrațiile globale nealegite să își depășească scopul.
Pauline Hanson a adus în discuție pentru prima dată în parlament, în 1996, activitatea trădătoare a ONU. În primul meu discurs în Senat, în 2016, am cerut ca Australia să iasă din ONU - AusEXIT.
Am fost atât de vehement împotriva cedării suveranității australiene în favoarea alianței nebunești ONU-FEM, încât recent WEF ne-a chemat în mod special.
Ne-am băgat sub pielea lor.
Această luptă nu s-a încheiat.
Toate puterile terifiante propuse, care au fost respinse sumar în această săptămână, sunt duplicate în propunerea de Tratat OMS privind pandemia.
Tratatul privind pandemia este o a doua încercare de a transforma OMS în poliția mondială a sănătății.
Tratatul privind pandemia este viu și nevătămat, așteptând în sistem ca "liderii" noștri să îl semneze.
Dacă Tratatul privind pandemia ar fi aprobat, acesta ar pune în aplicare toate puterile obligatorii în materie de sănătate pe care alții din cadrul OMS tocmai le-au respins. Ce mizerie!
Organizația Mondială a Sănătății este prea mare, prea birocratică, prea îndepărtată de oamenii pe care ar trebui să îi ajute, coruptă, incompetentă, necinstită și, mai presus de toate, prea apropiată de industria farmaceutică.
Următorul pas pentru a proteja suveranitatea Australiei în materie de sănătate este să ne asigurăm că Tratatul privind pandemia este respins și că prim-ministrul nu îl va semna.
Pentru australienii îngrijorați care au scris membrilor parlamentului lor și care au primit un răspuns care spune că tratatul trebuie să treacă mai întâi prin Parlament - acest lucru nu este adevărat.
Tratatul OMS privind pandemia include o dispoziție conform căreia acesta devine obligatoriu pentru Australia în momentul în care reprezentantul nostru la OMS îl semnează.
Nu este necesară o supraveghere parlamentară.
La naiba cu asta.
Munca One Nation continuă.
VICTORIE MARE ȘI FRUMOASĂ! Organizația Mondială a Sănătății a renunțat la amendamentele propuse la Regulamentul Internațional de Sănătate pentru vaccinarea obligatorie și blocarea obligatorie. Raportul final al Comisiei Internaţionale de Revizuire a Regulamentului Sănătăţii, publicat în această săptămână, a abandonat amendamentele propuse.
OMS va rămâne un organ consultativ.
Cererile distopice, cum ar fi permiterea Organizației Mondiale a Sănătății să emită rețete obligatorii de sănătate dincolo de controlul statului și al guvernului federal, au fost respinse.
Aceasta include puterile propuse care ar fi permis OMS să supravegheze:
sisteme de dovadă a vaccinării sau a statutului vaccinului;
proceduri de carantină;
Mișcările și mobilitatea cetățenilor,
vaccinare forțată,
Închidere,
blocuri,
Detenție obligatorie și,
mai mult abuz inacceptabil asupra ființelor umane.
Pune capăt „pașaportului de sănătate” universal – sau pașaportului vaccin – care trebuia să controleze permanent capacitatea cetățenilor de a călători între țări. Mulțumesc țărilor non-vestice pentru blocarea OMS!! Stăm cu ochii pe ce urmează:
5 G / Semnati initiativa cetateneasca cu privire la aplicarea tehnologiei 5G. /Folosind WIFI poti fi vazut prin pereti / Despre închisoarea digitala spre care ne îndreptăm si vax obligatorie
https://eci.ec.europa.eu/021/public/#/screen/home
Emisiunea
despre Intiativa Cetateneasca Europeana STOP (((5G))) cu Aurelian Popa
si Dumitru Fornea de la Comitetul Economic Social European, raportor pe
urmatoarele avize:
Impactul societal și ecologic al ecosistemului 5G Identitatea digitală, suveranitatea datelor și calea către o tranziție digitală justă în societatea informațională
Semnati, distribuiti si cel mai important trimiteti-ne chitanta 
1 Intrati la adresa https://eci.ec.europa.eu/021/public/#/screen/home 2 In partea dreapta aveti o caseta cu chenar galben unde selectati Romania si se va deschide formularul 3 Selectati cartea de identintate apasand unde scrie CNP 4 Introduceti la numar seria si numarul Cartii de Identitate legate LLNNNNN5 Completati prenumele complet daca aveti mai multe6 Completati numele de familie 7 Introduceti in chenar literele pe care le vedeti in chenarul roz 8 Bifati ambele casute cu Certific... Am citit .... 9 Apasati pe Sustineti 10
Dupa ce ati apasat pe Sustineti va va aparea in aceeasi pagina in
partea stanga caseta cu identificatorul semnaturii si posibilitatea de
descarcare si salvare chitanta, apasati si salvati sau faceti si o
captura de ecran. Ne trebuie idendificatorul de semnatura si data.11 trimiteti pentru numaratoarea paralela fisierul chitanta sau captura de ecran la romania.eci@protonmail.com
https://www.facebook.com/groups/528426001731596
IN BUCURESTI ANTENELE 5G NU AU AUTORIZATII, DECI ILEGALE.
In imaginile de mai jos sunt raspunsurile primite de la Primaria Municipiului Bucuresti.
Urmeaza sa depunem la primariile de sector.
Sunt multe de spus dar si mai multe de facut concret.
Daca nu va implicati serios, fiecare in sectorul/orasul lui sa nu mai veniti la vaicareala si comentacareala aiurea pe facebook, ca veniti degeaba.
Memoriul model care trebuie adaptat este la http://stop5gromania.ro/04-11-2022-solicitare-catre.../
La cererea grupului civic care va merge sa depuna memoriul vom extrage si atasa si semnaturile petitiei colective din orasul respectiv.
S-a pornit o initiativa cetateneasca cu privire la aplicarea tehnologiei 5G.
Ce inseamna asta?
Asa ca intrati pe link ul acesta si semnati-o:
(aveti in dreapta: CNP, nume, prenume si cod de verificare.
Le introduceti si semnati.
Initiativa este pe pagina Comisiei Europene (europa.eu), asa ca nu sunt riscuri de strangere de date personale de nu stiu cine.
Aia de la UE deja le au, ca multe baze de date sunt create, interconectate, interoperabile).
Proiectul de lege europeana care se doreste a fi initiat vizeaza aceste aspecte:
Obiective
Implementarea tehnologiei 5G ne pune în pericol drepturile la un mediu sănătos, libertate și viață privată.
Solicităm Comisiei să propună acte legislative pentru a proteja cetățenii și mediul de aceste amenințări:
1. Radiațiile au un efect negativ asupra oamenilor, faunei și florei. Limitele actuale de expunere oferă o protecție insuficientă, în special pentru persoanele vulnerabile (cum ar fi copiii, femeile însărcinate, pacienții, persoanele în vârstă), animale, insectele polenizatoare și plante
– Trebuie adoptate reglementări în vederea protejării tuturor formelor de viață împotriva radiațiilor generate de frecvențele radio și microunde *
2. Odată cu implementarea tehnologiei 5G va exploda numărul de dispozitive electronice conectate, antene și sateliți. Aceasta va avea ca urmare un consum nesustenabil de energie, emisii de radiații, mineritul dăunător și poluarea, punând în pericol biodiversitatea și habitatele naturale
– Trebuie adoptate reglementări mai stricte pentru a proteja mediul de toate impacturile tehnologiei 5G și ale digitalizării*
3. Tehnologia 5G permite colectarea masivă de date și supravegherea prin intermediul obiectelor conectate. Acest lucru va spori riscul criminalității informatice, al scurgerii de date, al furtului, al revânzării și al utilizării abuzive a inteligenței artificiale
– Trebuie adoptate reglementări în vederea asigurării unei protecții eficace a datelor pentru a ne proteja viața privată, securitatea și libertatea *
PS: Din Romania ne trebuie minim 23.265 semnaturi.
Nu suntem in stare sa le strangem?
Termen pentru strangerea semnaturilor: 01 martie 2023.
Nu se strang, este pa!
https://www.facebook.com/groups/528426001731596
Aparatul-spion din casa noastră, prin care oamenii de ştiinţă reușesc să „vadă" în detaliu oamenii prin pereţi. Cercetătorii de la Universitatea Carnegie Mellon au dezvoltat o metodă pentru detectarea formei tridimensionale şi a mişcărilor corpurilor umane într-o cameră, folosind doar routere WiFi, informeaza publicaţia Vice.
Potrivit publicaţiei, pentru a face acest lucru, ei au folosit DensePose, un sistem de cartografiere a tuturor pixelilor de pe suprafaţa unui corp uman într-o fotografie. DensePose a fost dezvoltat de cercetători din Londra şi de cercetătorii AI de la Facebook. De acolo, potrivit unui articol recent publicat pe arXiv, au dezvoltat o reţea neuronală profundă care înrgistrează faza şi amplitudinea semnalelor WiFi trimise şi primite de routere la coordonatele de pe corpurile umane.
Cercetătorii lucrează de ani de zile pentru a „vedea" oamenii fără a folosi camere sau hardware LIDAR scump [lidar este acronim pentru „light detection and ranging" - detectarea şi localizarea luminii, n.n.]. În 2013, o echipă de cercetători de la MIT a găsit o modalitate de a folosi semnalele telefoanelor mobile pentru a vedea prin pereţi; în 2018, o altă echipă de la MIT a folosit WiFi pentru a detecta persoanele dintr-o altă cameră şi a concretiza mişcările acestora în figurine din beţe mişcătoare.
Cercetătorii de la Carnegie Mellon au scris că sunt de părere că semnalele WiFi „pot servi ca un substitut omniprezent" pentru camerele RGB normale, atunci când vine vorba de „detectarea" persoanelor dintr-o cameră. Folosind WiFi, au scris ei, se depăşesc obstacole precum iluminarea slabă şi ocluzia cu care se confruntă lentilele camerelor obişnuite.
În mod bizar, ei etichetează acest progres ca fiind unul ce priveşte dreptul la intimitate.
„În plus, protejează intimitatea indivizilor, iar echipamentul necesar poate fi cumpărat la un preţ rezonabil. De fapt, majoritatea gospodăriilor din ţările dezvoltate au deja WiFi acasă, iar această tehnologie poate fi extinsă pentru a monitoriza bunăstarea persoanelor în vârstă sau pur şi simplu pentru a identifica comportamente suspecte la domiciliu", au scris ei.
Aceştia nu menţionează însă ce ar putea însemna „comportamente suspecte", dacă această tehnologie va ajunge vreodată pe piaţa de masă. Dar având în vedere că anumite companii precum Amazon încearcă să introducă drone cu camere de luat vederi în casele noastre, este uşor să ne imaginăm cum detectarea umană generalizată prin WiFi ar putea fi o forţă pentru a face bi, ori o altă medotă de exploatare a intimităţii noastre.
https://www.facebook.com/groups/528426001731596
Prezentarea sumara din Parlamentul European din 7 februarie 2023 a Initiavei Cetatenesti Europene STOP (((5G))) de catre organizatia fondatoare.
Asa aveti motive sa semnati cat mai multi sa vedeti cat de serioasa este aceasta initiativa. https://www.youtube.com/watch?v=GrBNp_sWBkA
#STOP5GUE #SEPoate Semnati, distribuiti si cel mai important trimiteti-ne chitanta pentru numaratoarea paralela. Mai jos sunt pasii de urmat.
Pasul 1 Intrati la adresa https://eci.ec.europa.eu/021/public/#/screen/home Pasul 2 In partea dreapta aveti o caseta cu chenar galben unde selectati Romania si se va deschide formularul Pasul 3 Selectati cartea de identintate unde scrie CNP Pasul 4 Introduceti la numar seria si numarul Cartii de Identitate legate LLNNNNNPasul 5 Completati prenumele complet daca aveti mai multePasul 6 Completati numele de familie Pasul 7 Introduceti in chenar literele pe care le vedeti in chenarul roz Pasul 8 Bifati casutele cu Certific prin prezenta că informațiile furnizate în acest formular sunt corecte și că nu am mai susținut anterior această inițiativă.Am citit declarația de confidențialitate și conținutul inițiativei cetățenești.
Pasul 9 Apasati pe sustineti Pasul 10 Dupa ce ati apasat pe sustineti va va aparea in aceeasi pagina in partea stanga caseta cu identificatorul semnaturii si posibilitatea de descarcare si salvare chitanta apasati si salvati si faceti si o captura de ecran. Pasul 11 trimiteti fisierul chitanta sau captura de ecran in care sa se vada data si identificatorul la adresa de email romania.eci@protonmail.comMultumim tuturor pentru solidaritate si determinare!
In seara aceasta vom face o emisiune si noi sa detaliem!
https://www.tiktok.com/@stefanstefanut18
marți, 21 februarie 2023
duminică, 19 februarie 2023
vineri, 17 februarie 2023
PANDEMIA FINALA
https://www.bitchute.com/channel/qtfmzk82KQOb/
https://www.facebook.com/leonard.chesca
CALUL TROIAN AL PLANDEMIEI FINALE
Cei vaccinați sunt Calul Troian al noii pandemii, ei poartă în mod latent ”ouăle” prionilor ce vor declanșa Plandemia Finală !
PLANDEMIA MARBURG ȘI APOCALIPSA ZOMBIE
În interiorul nanoparticulelor lipidice, în hidrogel, există agenții biologici, microrganisme precum bacterii și / sau stafiloicoci (prioni), prin care vor produce infestarea oamenilor.
Eliberarea acestora din ”ouăle” de hidrogel se va face prin emiterea unor impulsuri electromagnetice de 18 Ghz, prin sistemele 5G montate în toată lumea, sub incidența cărora aceste capsule de hidrogel se umflă și eliberează astfel agenții patogeni în organismele celor vaccinați. Această îmbolnăvire și mortalitate masivă, cât și zombificarea unora dintre cei afectați, o să fie ceea ce au planificat deja să se numească Pandemia Marburg. prin ștergerea genei IP36, unii vor fi transformați în zombi, devenind extrem de violenți, cu comportament animalic și pornici canibalice.
16 februarie 2023
Vedeți și :
Ouă de paraziți, care eclozează în sângele vaccinaților !
SHEDDING, fenomenul de posibilă transmitere a proteinei Spike de la vaccinați la nevaccinați.
Adevărul despre vaccin, dezvăluit de Celeste Solum, ofițer FEMA!
Pregătiri secrete pentru un eveniment major de extincție în masă la nivel global.
Oameni de știintă au comparat la microscop mostre de sânge ale celor injectați cu serurile experimentale BigFarma cu mostre de sânge ale persoanelor nevaccinate.
Controlul oamenilor de la distanță prin undele de radio-frecvență.
DARPA, vaccinarea și 5G.
Nanotehnologia, tehnologia 5G, și coronavirusul sunt toate în legătură.
Slovacă acuză că testele Covid administrează Darpa Hidrogel și Litiu
DARPA SBIR: Profusa Implantable Biosensors - COL Matt Hepburn
MAGNETO. Noua metodă de controlare a creierului și a comportamentului de la distanță - Proteina Magneto, modificată genetic.
APOCALIPSA ZOMBIE
CDC - Pregătiri pentru Apocalipsa Zombie ?!
Alexa despre apocalipsa zombi. https://www.facebook.com/leonard.chesca/videos/10225315441221487
Apocalipsa, adusa din laboratoare? Ce virusuri ne-ar putea distruge.
Guvernul SUA Spune Sa Ne Pregatim De O Apocalipsa Zombi - Ce Zic Oamenii De Stiinta.
Zombie apocalypse - Ce mai pregătesc acești satanici.
Antrenament simulare apocalipsă zombi.
O afecțiune rară și mortală a creierului, care este cauzată de proteine deformate cunoscute drept prioni.
joi, 16 februarie 2023
sâmbătă, 11 februarie 2023
miercuri, 8 februarie 2023
luni, 30 ianuarie 2023
Dr. RIFE VINDECĂ CANCERUL CU FRECVENȚĂ. DAR APROAPE NIMENI NU ȘTIE DESPRE ASTA
Dr. RIFE VINDECĂ CANCERUL CU FRECVENȚĂ. DAR APROAPE NIMENI NU ȘTIE DESPRE ASTA
Potrivit Dr Royal R. Rife, fiecare boală are o frecvență: anumite frecvențe pot împiedica dezvoltarea unei boli, în timp ce altele o distrug în schimb.
El a descoperit că anumite frecvențe pot împiedica dezvoltarea unei boli, în timp ce altele o distrug în schimb. Substanțele cu frecvență mai înaltă distrug bolile de joasă frecvență.
Inventatorul Nikola Tesla (1856 – 1943), pionier al tehnologiei electrice, a declarat că dacă am putea elimina anumite frecvențe externe care interferează cu corpurile noastre, am avea o rezistență mai mare la boli.
Fiecare ulei esențial, de exemplu, are o frecvență, la fel ca fiecare organ și parte a corpului nostru. Frecvența unui ulei esențial, va atrage o frecvență similară în organism. Frecvențele joase devin un burete pentru energia negativă. Frecventa este ceea ce ramane in organism, pentru a mentine efectele uleiului, mult timp.
Frecvențele joase operează schimbări fizice în organism. Frecvențele medii operează schimbări emoționale. Frecvențe mai înalte, schimbările spirituale operează în corp.
Frecvențele spirituale, variază între 92 și 360 Hz. (de exemplu, frecvența oaselor este 38-43). Dr. Robert O. Becker, în cartea sa „The Body Electric”, explică faptul că sănătatea unui individ poate fi determinată de frecvența din corpul persoanei.
Un alt medic și om de știință, a cărui cercetare a fost îngropată de ceva timp, dar din fericire a revenit la suprafață datorită muncii avocaților sârguincioși, este Dr. Royal Raymond Rife, care dezvoltă un generator de frecvență în anii '20.
Rife a tratat cu succes 1.000 de pacienți diagnosticați cu cancer incurabil în anii 1930.
I s-a conferit 14 premii și un doctorat în onoremă. După ce nicio farmacie nu a reușit să-i cumpere cercetările și echipamentele, biroul i-a fost închis, cercetările și documentele au fost furate, iar aparatul care vindeca toți cei 1.000 de „pacienți de cancer incurabili” a fost distrus.
În 1934, înainte de a avea loc distrugerile, Universitatea din California de Sud a numit un comitet special de cercetare medicală, pentru a aduce bolnavi de cancer în fază terminală de la Spitalul Județean Pasadena la Laboratorul și Clinica Rife din San Diego pentru terapie. . . Echipa a inclus medici și patologii care au fost acuzați de examinarea pacienților timp de 90 de zile dacă aceștia mai erau în viață.
După 90 de zile de tratament, Consiliul a concluzionat că 86,5% dintre pacienți au fost complet vindecați.
Așa s-a constatat o modalitate de tratament și restul de 13,5% dintre pacienți au răspuns pozitiv în următoarele 4 săptămâni.
Deci rata totală de recuperare cu utilizarea tehnologiei Rife, a ajuns la 100%. @TAG)
Ce a dezvoltat Rife a fost un leac 100% eficient pentru multe forme de cancer. Deci de ce nu știm nimic despre asta și de ce există atât de multe baze pentru cercetarea cancerului?
Simplu spus, motivul este din motive economice ale comunității medicale ortodoxe, care se bazează pe fondurile de cercetare a cancerului. Astfel de fonduri provin adesea de la companiile farmaceutice, ale căror averi ar fi în pierdere dacă s-ar găsi un leac pentru cancer. E în regulă să “cautați” un leac, dar nu trebuie să găsiți unul! )
Aceasta este o poveste care ilustrează o altă mare încercare a comunității medicale principale de a controla viețile și morțile atâtor milioane.
„În toate culturile și în fiecare tradiție medicală dinaintea noastră, vindecarea era însoțită de mișcarea energiei”, a declarat Albert Szent-Gyorgyi, Premiul Nobel pentru Medicină (1937).
Ceea ce a demonstrat Rife este ca fiecare tulburare de sanatate are o frecventa, care din contra raspunde (rezoneaza) la o frecventa specifica, optima pentru vindecarea-dizolvarea ei in organism.
Persoanele care își mențin frecvența optimă, cel puțin a sistemului imunitar, vor putea preveni dezvoltarea simptomelor și bolilor Evident că ar trebui luat în considerare că majoritatea dintre noi, trăim mult stres și dificultăți emoționale la un dai ly basis ive, care scade frecvența de Corpul.
Totusi, ar trebui sa ridicam periodic frecventa organismului, cu substantele potrivite, compatibile la nivel celular/energetic cu fiinta noastra, decat sa asteptam ca frecventa corpului nostru sa scada la un nivel atat de scazut, sa devina o gazda placuta pentru invadatorii microscopici...
sâmbătă, 28 ianuarie 2023
joi, 26 ianuarie 2023
Dr Judy Mikovits - Is Coronavirus A Plandemic? Exposing The Truth Behind America's COVID-19 Strategy London Real 2.14M subscribers
LR --Ce crezi că se întâmplă cu adevărat?
JM-Cred că e o ciumă.de corupție și cred că modul în care publicul larg poate aprecia este că măsurile care au fost luate... la nivel mondial, lucruri cum ar fi măștile, să stai în casă.închiderea toaletelor publice ,închiderea plajelor publice, acestea nu sunt măsuri , acestea nu sunt măsuri de sănătate publică care ar pune capăt unei epidemii virale ci, de fapt, ar putea să o prelungească și să facă pe cei mai vulnerabili și mai vulnerabili, deoarece imunitatea vindecătoare a soarelui, a mării, a nisipului, a exercițiilor fizice... cei mai vulnerabili. sunt protejați de fapt de cei sănătoși care sunt expuși dezvoltă un răspuns imunitar adecvat și știm acum că ceea ce numim "turmă" imunitatea a avut loc în locuri precum Suedia, cred că în Coreea de Sud.unde nu s-au luat măsuri draconice, așa că libertatea care a fost luată...de a avea grijă de propria noastră sănătate este motivul pentru care consider că este o plagă decorupție și astfel ne vedeți făcând aproape exact opusul a ceea ce am făcut,ar trebui să facem chiar acum, absolut toate măsurile care au fost promovate de oficialii noștri federali de aici cu excepția vaccinării împotriva gripei. recomandări care acum publicațiile arată clar că oamenii sunt mai susceptibili la infecția cu coronavirusuri dacă se vaccinează împotriva gripei și totuși aici și în Italia, aici, în Statele Unite și în Italia, um două dintre locurile care au fost cele mai afectate, aceste vaccinuri sunt în continuare, deși nu sunt obligatorii, sugerate și și și administrate celor mai vulnerabili, celor mai în vârstă, celor care...au um comorbidități și care sunt publicate ca fiind cele mai grave.
LR--Da, îmi amintesc că Dr. Burks, la una dintre conferințele lui Trump, a spus că știi că...trebuie să te vaccinezi împotriva virusului gripal, să te protejezi imediat.împotriva acestuia și totuși v-am auzit citând că, um, cresc cu 36% șansele de a contracta covid 19. Poate că o să vorbim pe scurt de ce ar spune așa ceva. Ce altceva? distanțarea, închiderea în sine, toate acestea sunt lucruri care ne vor face rău pe termen lung.
JM--Da, nu au nimic de-a face cu sănătatea publică... că este imunosupresor, este...este extrem de stresant, așa că vedem depresie, vedem anxietate, vedem frică în...
la copiii noștri, la bunicii care nu-și pot vedea zilele de naștere ale nepoților.um, știți, prietenii care își văd prietenii în măști pentru copiii mici, este... este...Chiar am de gând să fiu de durată în pagubele acestor măsuri, care într-adevăr nu protejează absolut nimic. Nu protejează pe nimeni de infectarea cu virusul.pot trece prin... pot prinde toxine, pot sa exacerbeze infecțiile respiratorii superioare prin activarea propriului virus pe măsură ce deveniți imuni suppressed, masele sunt extrem de stresate și corpul percepe asta prin suprimarea sistemului imunitar mai degrabă decât să-l îmbunătățească, ceea ce face soarele și dragostea și atingerea ,pentru noi.
LR --de fapt, avem nevoie de atingere și ceea ce ne oferă.este schimbul de germeni și microvirusuri cu alți oameni, oricum, asta face parte din viața noastră.
JM--Da, este un stimulent al imunității. Îți stimulează imunitatea.da, da, asta e ceea ce știm din generații de cercetări.aceste măsuri au mai fost luate până acum... și din nou, asta e puțin mai mult...toate datele de acum susțin puțin mai mult decât un sezon gripal normal cu
în ceea ce privește numărul de decese și numărul de persoane care sunt
um cel mai mult, cred că este de la unu la trei procente, toate datele arată că...
um de deces din cauza infecției cu coronavirus, cei mai mulți sunt um asimptomatici.
adică sunt oameni sănătoși, nu sunt purtători asimptomatici, au eliminat virusul.
Coronavirusurile nu se integrează, nu rămân cu tine, le elimini atunci când dezvolți un răspuns imunitar, da.
expus într-un alt an, dar, din nou, ai deja un anticorp, ești pregătit să răspunzi rapid și, probabil, dacă nu ești...
these measures been taken before um and and again this is is little more
7:20
all the data now support little more than a normal influenza season with
7:27
respect to um death and and the Very people who are
7:33
um most it's I think it's point one percent to point three percent all the data shows
7:39
um of death from from the coronavirus infection most are are um asymptomatic
7:45
meaning they're just healthy people they're not asymptomatic carriers they've cleared the virus um
7:50
coronaviruses don't integrate they don't stay with you you clear them when you develop immune response yes you can be
7:57
exposed in another year but again you've already got an antibody you're primed to respond quickly and likely unless you're
Viața după moarte. Ficțiuni și fapte | Conferință internațională online ...
" Misterele Ezoterice " isi propune sa priveasca lucrurile dintr-o dimensiune mai inalta.
• Sa exemplificam : Cilindrul din imaginea alaturata se poate "manifesta" , pentru un observator 3D, in acelasi timp , in cele doua planuri 2D, atat sub forma unui cerc cat si sub forma unui patrat (dreptunghi) . Pentru observatorii 2D ai acelor planuri , "manifestarea" 2D a cilindrului este o linie (privind - in dunga), din interiorul planului lor 2D. Deci pentru ambele planuri 2D "manifestarea" e identica, pentru nivelul de intelegere al observatorilor 2D, desi pentru observatorul 3D manifestarile difera. Observatorii 2D , nu au cum sa perceapa (cu simturile lor ) diferenta dintre cele doua manifestari, astfel incat pentru ei nu sunt nici un fel de diferente. Observatorul 3D (cu simturile lui mai extinse ) poate percepe atat "manifestarea" diferita in cele doua planuri 2D, cat si "manifestarea 3D a cilindrului, lucru imposibil pentru observatorii 2D sau poate posibil decat pentru cei mai iluminati dintre ei. Daca deplasam discutia catre un observator 4D, avem imaginea, prin analogie, a faptului ca si observatorii 3D (la nivelul lor de constiinta) , totusi nu aveau perceptia corecta (totala) a cilindrului. Pentru observatorul 4D (constiinta de nivel super celor 3D) , nici macar nu e un cilindru, iar "materializarea" simultana a obiectului in doua planuri 3D, era diferita. Deci o constiinta mai inalta se poate "manifesta" simultan in mai multe dimensiuni sub forme diferite. Perceptia observatorilor de constiinta mai joasa e total limitata. Acum sa deplasam aceasta discutie si la nivelul judecarii de catre observatori a binelui si raului. Judecata (limitata de nivelul constiintei) , cu siguranta ca nu va fi corecta si pot merge pana acolo incat sa afirm ca diferenta dintre bine si rau , nu e data de perceptia observatorului ci de factori precum : sistemul lui de credinte, educatie, socializare .
• Ne dorim a fi acei observatori 3D care incearca sa priveasca lucrurile constienti de aceste aspecte .
• Acum putem intelege cum e cu : "NU JUDECA"
• Reprezentativ este si filmuletul postat la : http://www.facebook.com/photo.php?v=537605589623766&set=vb.210417089009286&type=2&theater
Tu din ce dimensiune vrei sa privesti ?
Leonard Chesca
Azi am adoptat un om
“Azi am adoptat un om. Mi s-a frânt inima să-l văd atât de singur și confuz. Și dintr-o dată am primit ochii lui înlăcrimați pentru a-i întâlni pe Nu-mi place mirosul tristeții. Îmi doream atât de mult să sar pe el. Mi-a vorbit cu drăgălășenie și eu știam, trebuia să-l salvez! acel om avea nevoie de mine. Asa ca latru cu toata puterea mea l-am urmarit blocuri si blocuri.
M-am apropiat, i-am putut mirosi mâinile. Omul a zâmbit o clipă și când m-a luat în brațe, am început să-i simt inima de înghețată caldă. M-am apropiat de obrajii lui și am simțit o lacrimă rostogolită pe L-am privit profund și răspunsul lui a fost un zâmbet strălucitor. Am sărit emoționată în brațele lui, i-am promis să mă port frumos, să-l iubesc mereu și să nu mă despart niciodată de partea lui
Ce norocos a fost că a trecut prin blocul ăla, pe strada aia și mă simt și eu norocos. Erau atât de mulți oameni care se plimbau și nimeni nu se uita la mine. Toți îngrijorați, toți în necazurile lor. Mă bucur că nu m-a ales nimeni altcineva. Astăzi am salvat o viață. Astăzi am adoptat un om” 
marți, 24 ianuarie 2023
ALTA VESTE BUNA -INACTIVEAZA SI SCOATE DIN CORP PROTEINA SPIKE
NEW STUDY: Stop Damage & Remove Spike Proteins & DNA Programmable Robot Math Matrix w/ Dr. Edwards
Nota redacției: Acesta este un mijloc promițător de a opri atașarea proteinei spike la celulă și de a le elimina din organism. După cum mulți știu, tratamentul cu ARNm cauzează daune masive din cauza proteinelor spike care se atașează de celulele corpului. Acest studiu a fost publicat inițial pe PubMed Central, The National Library of Medicine.
Acest tratament sugerat este disponibil fără prescripție medicală în Statele Unite, ceea ce face ca acest lucru să fie și mai promițător. S-a demonstrat că soluția de dioxid de clor (sau oxid de gemeni) elimină, de asemenea, proteinele spike, dar folosește un mecanism diferit. După cum se menționează în Documentul nostru de soluții realizat de Dr. Joe Neusma, "Aceste tratamente pot fi utilizate în mod sinergic pentru a oferi o soluție mai puternică". Consultați documentul de soluții pentru mai multe detalii.
Combinația de bromelaină și acetilcisteină (BromAc) inactivează sinergic SARS-CoV-2
Autori:
Javed Akhter,1,2,† Grégory Quéromès,3,† Krishna Pillai,2,† Vahan Kepenekian,1,4,† Samina Badar,1,5 Ahmed H. Mekkawy,1,2,5 Emilie Frobert,3,6,‡ Sarah J. Valle,1,2,5,‡ și David L. Morris1,2,5,*‡
Kenneth Lundstrom, editor academic și Alaa A. A. Aljabali, editor academic
Rezumat
Infecția cu coronavirusul sindromului respirator acut sever (SARS-CoV-2) este cauza unei pandemii mondiale, în prezent cu opțiuni terapeutice limitate. Glicoproteina spike și proteina de înveliș a SARS-CoV-2, care conțin punți disulfidice pentru stabilizare, reprezintă o țintă atractivă, deoarece sunt esențiale pentru legarea la receptorul ACE2 în celulele gazdă prezente în mucoasa nazală. Bromelaina și acetilcisteina (BromAc) au o acțiune sinergică împotriva glicoproteinelor prin ruperea legăturilor glicozidice și a legăturilor disulfidice. Am căutat să determinăm efectul BromAc asupra proteinelor spike și de înveliș și potențialul său de a reduce infectivitatea în celulele gazdă. Proteinele recombinate ale vârfului și ale învelișului SARS-CoV-2 au fost distruse de BromAc. Legăturile disulfidice ale proteinelor de vârf și de înveliș au fost reduse de acetilcisteină. În cultura in vitro a virusului întreg, atât a mutanților de tip sălbatic, cât ș i a mutanților de tip spike, SARS-CoV-2 a demonstrat o inactivare dependentă de concentrație în urma tratamentului cu BromAc, dar nu ș i în urma utilizării unui singur agent. Testarea clinică prin administrare nazală la pacienții cu infecție timpurie cu SARS-CoV-2 este iminentă.
1. Introducere
Coronavirusul 2 al sindromului respirator acut sever 2 (SARS-CoV-2), care a apărut recent, este agentul cauzal al bolii coronavirus 2019 (COVID-19), care poate varia de la forme asimptomatice la forme severe și letale cu sindrom de răspuns inflamator sistemic. Până la 21 februarie 2021, au fost raportate peste 111 milioane de cazuri confirmate, cu o mortalitate generală estimată la 2,2% [1]. În prezent, există puțini agenți terapeutici care s-au dovedit a fi benefici în reducerea progresiei bolii în stadii incipiente și tardive [2]. Deși, din fericire, există numeroase vaccinuri candidate, este posibil ca disponibilitatea lor pe scară largă pentru vaccinare să nu fie imediată, durata protecției imunitare să fie limitată [3,4], iar eficacitatea vaccinurilor poate fi redusă de variantele noi ale SARS-CoV-2. Prin urmare, este încă necesară explorarea continuă a unor tratamente eficiente.
Din punct de vedere structural, SARS-CoV-2 conține proteine de vârf de suprafață, proteine de membrană și proteine de înveliș, precum și nucleoproteine interne care împachetează ARN-ul. Proteina spike este un complex glicoproteic homotrimeric cu roluri diferite realizate prin modificări conformaționale dinamice, bazate în parte pe legături disulfidice [5]. Aceasta permite infectarea celulelor-țintă prin legarea la receptorii enzimei umane de conversie a angiotensinei (ACE2), printre altele, ceea ce declanșează proteoliza de către serina proteazei transmembranare 2 (TMPRSS2), furina și, probabil, alte proteaze, ceea ce duce la fuziunea virionului și a membranei celulei gazdă [6,7].
Intrarea virusurilor în celulele mamiferelor, sau "internalizarea virusului", este un mecanism-cheie al infecției cu virusuri învelite și se bazează pe modificări conformaționale dinamice ale glicoproteinelor de suprafață ale acestora, și anume, așa cum sunt mediate de reducerea legăturilor disulfidice și reglementate de oxiordoreductazele și proteazele de la suprafața celulară [5,8,9,9,10,11]. S-a demonstrat că intrarea SARS-CoV-2 în celulele gazdă începe cu destabilizarea proteinei spike prin tranziție mecanică alosterică, care induce o schimbare conformațională de la starea închisă "down" la starea deschisă "up" a domeniului de legare a receptorului (RBD) al proteinei spike [12,13]. Modificările conformaționale ale RBD și legarea virusului sunt induse de TMPRSS2 sau de catepsina L, care declanșează tranziția de la starea de pre-fuziune la cea de post-fuziune [5,12,13]. Energia eliberată prin reducerea legăturii disulfidice crește flexibilitatea proteinei, care este maximă atunci când starea redusă este completă [8], permițând astfel fuziunea membranelor gazdă-virus, care altfel este imposibilă din cauza forțelor de hidratare repulsive prezente înainte de reducere [5].
Bromelaina este extrasă în principal din tulpina plantei de ananas (Ananas comosus) și conține o serie de enzime care îi conferă capacitatea de a hidroliza legăturile glicozidice din carbohidrații complecși [14]. Studii anterioare au indicat că bromelaina elimină proteinele spike și hemaglutinina virusului Semliki Forest, virusului Sindbis, coronavirusului gastrointestinal al șoarecilor, virusului encefalomielitei hemaglutinante și virusurilor gripale H1N1 [15,16]. Ca moleculă terapeutică, este utilizată pentru debridarea arsurilor. Acetilcisteina este un antioxidant puternic care este frecvent nebulizat în căile respiratorii pentru acumularea de mucus și este, de asemenea, utilizat ca agent hepatoprotector în supradozajul de paracetamol. Cel mai important în contextul actual, acetilcisteina reduce legăturile disulfidice [17]. Mai mult, asocierea proteinelor spike și a proteinei de înveliș prin motivele lor triple de cisteină respective justifică ipoteza impactului asupra stabilității virionului în urma întreruperii punților disulfură prin acțiunea acetilcisteinei [18]. Combinația dintre bromelaină și acetilcisteină (BromAc) prezintă un efect mucolitic sinergic care este utilizat în tratamentul tumorilor mucinoase [19,20] și ca chimiosensibilizator al mai multor medicamente anticancerigene [21]. Aceste acțiuni diferite se datorează capacității BromAc de a desface structurile moleculare ale glicoproteinelor complexe, permițând astfel legarea datorită afinității ridicate dintre RBD și ACE2.
Prin urmare, în studiul de față ne-am propus să determinăm dacă BromAc poate perturba integritatea proteinelor spike și de înveliș ale SARS-CoV-2 și, ulterior, să examinăm potențialul său de inactivare împotriva replicării in vitro a două tulpini virale, inclusiv una cu o alterare a situsului de clivaj S1/S2 al unui mutant spike.
2. Materiale și metode
2.1. Materiale
Bromelaina API a fost produsă de Mucpharm Pty Ltd (Kogarah, Australia) sub formă de pulbere sterilă. Acetilcisteina a fost achiziționată de la Link Pharma (Cat# AUST R 170803; Warriewood, Australia). Proteina recombinantă SARS-COV-2 spike protein a fost obținută de la SinoBiological (Cat# 40589-V08B1; Beijing, China). Proteina recombinantă a învelișului a fost obținută de la MyBioSource (Cat# MBS8309649; San Diego, CA, SUA). Toți ceilalți reactivi au fost de la Sigma Aldrich (St. Louis, MO, SUA).
2.2. Electroforeza pe gel a spike-ului recombinant și a anvelopei
Proteinele de spike sau de înveliș au fost reconstituite în apă distilată sterilă în conformitate cu instrucțiunile producătorului, iar alicotele au fost congelate la -20 °C. Două micrograme ș i jumătate de proteină de spike sau de plic au fost incubate cu 50 sau 100 µg/mL de bromelaină, 20 mg/mL de acetilcisteină sau o combinație a ambelor în apă Milli-Q. Controlul nu conținea nici un medicament. Volumul total al reacției a fost de 15 µL pentru fiecare. După 30 de minute de incubare la 37 °C, în fiecare reacție s-au adăugat 5 µL de tampon de probă. Un total de 20 µL din fiecare reacție a fost electroforezat pe un SDS-PAGE (Cat# 456-1095; Bio-Rad Hercules, CA, SUA). Gelurile au fost colorate cu albastru Coomassie.
2.3. Detectarea spectrală UV a legăturilor disulfidice în proteinele din spike și din plic
Metoda lui Iyer și Klee pentru măsurarea vitezei de reducere a legăturilor disulfidice a fost utilizată pentru a detecta legăturile disulfidice în proteinele spike și înveliș [22]. Proteina de vârf recombinantă SARS-CoV-2 la o concentrație de 3,0 µg/mL în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) (pH 7,0) care conține 1 mM de acid etilendiaminotetraacetic (EDTA) a fost incubată cu 0, 10, 20, 40 și 50 µL de acetilcisteină (0. 5 M), agitat la 37 °C timp de 30 de minute, urmat de adăugarea echivalentă de ditiotreitol (DTT) (0,5 M) și agitat timp de încă 30 de minute la 37 °C. Proteina spike a fost incubată în paralel numai cu DTT (0,5 M), ca mai înainte, fără acetilcisteină, și a fost agitată la 37 °C timp de 30 de minute. Absorbția a fost apoi citită la 310 nm. Detectarea spectrală UV a legăturilor disulfidice în proteina de înveliș a fost realizată în mod similar.
2.4. Inactivarea virusului întreg SARS-CoV-2 cu BromAc
Respectând pe deplin orientările provizorii de biosecuritate ale Organizației Mondiale a Sănătății (OMS) referitoare la boala coronavirusului, testele de inactivare a virusului întreg SARS-CoV-2 au fost efectuate cu o tulpină de tip sălbatic (WT) reprezentativă pentru virusurile europene care circulă devreme (număr de acces GISAID EPI_ISL_578176). O a doua tulpină SARS-CoV-2 (notată ∆S), raportată în urma supravegherii genomice de rutină în regiunea Auvergne-Rhône-Alpes din Franța, a fost adăugată la testele de inactivare datorită unei mutații rare în situsul de clivaj S1/S2 și a disponibilității culturii sale în laborator (număr de acces GISAID EPI_ISL_578177).
Aceste teste au fost efectuate cu concentrații crescânde de bromelaină singură (0, 25, 50, 100 și 250 µg/mL), acetilcisteină singură (20 mg/mL) și reacția încrucișată a diferitelor concentrații de bromelaină combinate cu o formulare constantă de acetilcisteină de 20 mg/mL, față de două diluții de culturi de virus la 105,5 și 104,5 TCID50/mL. După 1 h de expunere la medicament la 37 °C, toate condițiile, inclusiv controlul, au fost diluate de 100 de ori pentru a evita citotoxicitatea, inoculate în patru exemplare pe celule Vero confluente (CCL-81; ATCC©, Manassas, VA, SUA) și incubate timp de 5 zile la 36 °C cu 5% CO2. Celulele au fost menținute în mediu minim esențial Eagle (EMEM) cu 2% penicilină-streptomicină, 1% L-glutamină și 2% ser fetal bovin inactivat. Rezultatele au fost obținute prin observații zilnice la microscopul optic, un test de colorare a lizei celulare la punctul final și o reacție în lanț a polimerazei cu transcriptază inversă (RT-PCR) a extractelor de ARN supranatural. Pe scurt, testul de colorare a lizei celulare la punctul final a constat în adăugarea colorantului Neutral Red (Merck KGaA, Darmstadt, Germania) la monostraturile de celule, incubarea la 37 °C timp de 45 de minute, spălarea cu PBS și adăugarea de etanol citrat înainte de măsurarea densității optice (OD) la 540 nm (Labsystems Multiskan Ascent Reader, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SUA). DO a fost direct proporțională cu celulele viabile, astfel încât o DO scăzută ar însemna o liză celulară importantă datorată replicării virusului. În plus, ARN din supranaturile din puțuri a fost extras cu ajutorul stației de lucru semiautomate eMAG® (bioMérieux, Lyon, FR), iar RT-PCR a fost efectuată pe un sistem QuantStudio™ 5 (Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific, Foster City, CA, SUA). Valorile de reducere Log10 (LRV) ale replicării virale au fost calculate prin diferența dintre godeurile de tratament și cele de control pentru fiecare condiție împărțită la 3,3 (ca 1 log10 ≈ 3,3 PCR Praguri de ciclu (Ct)).
2.5. Cinetica replicării prin analiză celulară în timp real
Pentru a compara capacitatea de replicare in vitro a tulpinilor WT și ∆S SARS-CoV-2, cinetica de replicare a fost determinată prin măsurarea impedanței electrozilor senzorilor celulare microelectronice pe instrumentul xCELLigence Real-Time Cell Analyzer (RTCA) DP (ACEA Biosciences, Inc., San Diego, CA, SUA). Celulele Vero au fost însămânțate la 20.000 de celule pe puț pe o placă E-Plate 16 (ACEA Biosciences, Inc., San Diego, CA, SUA) și incubate în aceleași condiții de mediu descrise anterior la 36 °C cu 5% CO2. După 24 de ore, izolatele de cultură SARS-CoV-2 au fost inoculate în triplu exemplar la o multiplicitate de infecție de 10-2. Infecțiile simulate au fost efectuate în patru exemplare. Datele de impedanță electronică (indice celular) au fost colectate în mod continuu la intervale de 15 minute timp de 6 zile. Analiza suprafeței sub curbă a indicelui celular normalizat, stabilit în momentul inoculării, a fost apoi calculată la intervale de 12 ore. La fiecare interval, viabilitatea celulară a fost determinată prin normalizarea față de controlul celular corespunzător. Testele de comparație multiplă Tukey au fost utilizate pentru a compara fiecare condiție pe GraphPad Prism (versiunea software 9.0; San Diego, CA, SUA).
3. Rezultate
3.1. Alterarea proteinelor SARS-CoV-2 Spike și Envelope Proteine
Tratamentul proteinei spike cu acetilcisteină singură nu a prezentat nicio alterare a proteinei, în timp ce concentrațiile de Bromelain la 50 și 100 µg/mL și BromAc la 50 și 100 µg/20 mg/mL au dus la alterarea proteinei (figura 1A). Tratamentul cu acetilcisteină pe proteina de înveliș nu a alterat proteina, în timp ce tratamentul cu Bromelain la 50 și 100 µg/mL și BromAc la 50 și 100 µg/20 mg/mL a dus, de asemenea, la o fragmentare aproape completă și, respectiv, completă (figura 1A).
Figura 1
(A) Bromelaina și acetilcisteina prezintă un efect sinergic asupra destabilizării vârfurilor și a proteinei de înveliș ale coronavirusului sindromului respirator acut sever (SARS-CoV-2). SDS-PAGE a subunităților S1 + S2 ale proteinei de vârf recombinante SARS-CoV-2 (150 kDa) și a proteinei de înveliș (25 kDa). Proteinele au fost tratate cu 20 mg/mL de acetilcisteină singură, 100 și 50 µg/mL de bromelaină singură și o combinație de 100 și 50 µg/20 mg/mL de BromAc. (B) Reducerea disulfidelor din proteina de vârf a SARS-CoV-2 recombinantă prin acetilcisteină. Testul diferențial între acetilcisteină (Ac) și ditiotreitol (DTT) pentru reducerea legăturilor disulfidice găsite pe proteina spike indică faptul că acetilcisteina reduce 42 % din legăturile disulfidice înainte de adăugarea de DTT. Legăturile rămase sunt reduse de DTT pentru a produce cromogenul detectat la 310 nm. (C) Reducerea disulfidelor proteinei de înveliș a SARS-CoV-2 recombinante de către acetilcisteină. Testul diferențial între acetilcisteină (Ac) și ditiotreitol (DTT) pentru reducerea legăturilor disulfidice găsite pe proteina de înveliș indică faptul că acetilcisteina reduce 40% din legături înainte de adăugarea de DTT.
3.2. 3.3.2. Detecția spectrală UV demonstrează alterarea legăturilor disulfidice în proteinele spike și învelișului
Reducerea comparativă a legăturilor disulfidice pe proteina spike între DTT singur și DTT cu acetilcisteină a demonstrat o diferență de 42 % (Figura 1B), pe baza pantei graficelor [0,002599/0,006171 (100) = 42 %]. Astfel, acetilcisteina a fost capabilă să reducă 58 % din legăturile disulfidice din probă, după care legăturile disulfidice rămase au fost reduse de DTT pentru a produce cromogenul care a fost monitorizat în spectre. În mod similar, testul diferențial dintre acetilcisteină și DTT pentru reducerea legăturilor disulfidice găsite în proteina de înveliș [0,007866/0,01293 (100) = 60%] indică faptul că acetilcisteina reduce 40% din legăturile disulfidice înainte de adăugarea de DTT (Figura 1C).
3.3. 3.3.3. Potențialul de inactivare in vitro a SARS-CoV-2 de către bromelaină, acetilcisteină și BromAc
Pentru ambele tulpini SARS-CoV-2 testate, controalele virusului netratat la 105,5 și 104,5 TCID50/mL au produs efecte citopatice (CPE) tipice și nu s-a observat citotoxicitate pentru niciuna dintre combinațiile de medicamente pe celulele Vero. Rezultatele optice ale CPE au fost invariabil confirmate prin colorarea celulelor Neutral Red la punctul final. În general, tratamentul cu bromelaină și acetilcisteină singure nu au prezentat nicio inhibiție virală, toate cu CPE comparabile cu cele din godeurile de control al virusului, în timp ce combinațiile BromAc au prezentat inactivarea virusului într-o manieră dependentă de concentrație (figura 2). Tratamentul pe titrări de virus de 104,5 TCID50/mL (figura 2B,D) a produs o inhibiție mai consistentă a CPE pentru cvadruplete decât pe titrări de virus de 105,5 TCID50/mL (figura 2A,C).
Figura 2
Testele de liză celulară au demonstrat potențialul de inactivare in vitro al combinației de acetilcisteină și bromelaină (BromAc) împotriva SARS-CoV-2. Viabilitatea celulară a fost măsurată prin colorarea celulelor cu Neutral Red, unde densitatea optică (OD) este direct proporțională cu celulele viabile. O DO scăzută ar însemna o liză celulară importantă datorată replicării virusului. Tulpina SARS-CoV-2 de tip sălbatic (WT) cu titru de 5,5 și 4,5 log10TCID50/mL (A și, respectiv, B) nu a prezentat nicio inhibiție a efectului citopatic (CPE) pentru tratamentul cu un singur agent, comparativ cu condiția de control a virusului de tratament simulat. Combinațiile BromAc au fost capabile să inhibe CPE, în comparație cu controalele celulare de infecție simulată. Tratamentul unei variante a proteinei spike a SARS-CoV-2 (∆S) cu o mutație la joncțiunea S1/S2 la titrări de 5,5 și 4,5 log10TCID50/mL (C și, respectiv, D) a arătat rezultate similare. Barele reprezintă media fiecărui cvadruplicat per condiție, ilustrată prin cercuri albe. A fost efectuată ANOVA ordinară cu o singură cale, utilizând controlul virusului de tratament simulat ca și condiție de control (**** p < 0,0001, *** p < 0,0005, ** p < 0,003 și * p < 0,05).
Pe baza liniilor directoare privind inactivarea virusului stabilite de OMS, un proces robust și fiabil de inactivare va fi capabil să reducă replicarea cu cel puțin 4 log [Valoarea de reducere Log10 (LRV) = (RT-PCR Ct tratament - RT-PCR Ct control)/3,3; ca 1 log10 ≈ 3,3 Ct]. Ca atare, s-a efectuat RT-PCR pe extractele de ARN pentru a măsura direct replicarea virusului. Pentru tulpina de tip sălbatic (WT) la 104,5 TCID50/mL, au fost observate succese LRV > 4 cu 1 din 4 godeuri, 2 din 4 godeuri, 3 din 4 godeuri și, respectiv, 4 din 4 godeuri pentru 25, 50, 100 și 250 µg/20 mg/mL BromAc (figura 3). Este demn de remarcat faptul că, la 105,5 TCID50/mL, LRV au fost ușor sub prag, în medie de 3,3, cu 3 din 4 godeuri și 2 din 4 godeuri pentru 100 și, respectiv, 250 µg/20 mg/mL BromAc (tabelul 1). Pentru mutantul proteinei spike (∆S) la 104,5 TCID50/mL, nu a fost observat niciun LRV > 4 cu succes pentru 25 µg/20 mg/mL BromAc, dar a fost observat în 4 din 4 godeuri pentru 50, 100 și 250 µg/20 mg/mL BromAc (figura 3). De remarcat că, la 105,5 TCID50/mL, LRV au fost ușor sub prag, în medie de 3,2, cu 1 din 4 godeuri, 2 din 4 godeuri și, respectiv, 4 din 4 godeuri pentru 50, 100 și 250 µg/20 mg/mL BromAc (tabelul 1). În general, inactivarea in vitro a capacității de replicare a ambelor tulpini SARS-CoV-2 a fost observată într-o manieră dependentă de doză, cel mai puternic demonstrată la 100 și 250 µg/20 mg/20 mg/mL de BromAc față de 104,5 TCID50/mL de virus.
4. Discuție
Combinația de bromelaină și acetilcisteină, BromAc, a inhibat sinergic infectivitatea a două tulpini SARS-CoV-2 cultivate pe celule Vero. Confirmarea proteinelor și proprietățile moleculare ale acestora depind de integritatea structurală și geometrică, care depind atât de legăturile peptidice, cât și de punțile disulfidice. Acetilcisteina, ca un bun agent reducător, tinde să reducă punțile disulfură și, prin urmare, să modifice proprietățile moleculare ale majorității proteinelor. Această proprietate a fost exploatată pe scară largă în dezvoltarea mai multor terapii (boli pulmonare obstructive cronice, boli alergice ale căilor respiratorii, fibroză chistică, pseudomixom peritoneu etc.) [20,23,24,24,25,26,27]. Mai recent, acetilcisteina a fost utilizată în dezvoltarea de terapii pentru infecții respiratorii, cum ar fi gripa și COVID-19 [28,29,30], unde integritatea proteinei spike este vitală pentru infecție [12,13]. Un mecanism de acțiune presupus ar putea fi desfășurarea glicoproteinei spike și reducerea legăturilor disulfidice ale acesteia.
Proteina spike a SARS-CoV-2 este piatra de temelie a legăturii virionului cu celulele gazdă și, prin urmare, reprezintă o țintă terapeutică ideală. O acțiune mecanică directă împotriva acestei proteine spike reprezintă o strategie de tratament diferită față de majoritatea medicamentelor antivirale existente, care împiedică intrarea virusului în celulele gazdă, mai degrabă decât să vizeze mașinăria de replicare. BromAc acționează ca un agent biochimic pentru a distruge glicoproteinele complexe. Competențele enzimatice multipotente ale bromelainei, dominate de capacitatea de a întrerupe legăturile glicozidice, completează în mod util puterea puternică a acetilcisteinei de a reduce legăturile disulfidice [17]. Analiza secvenței de aminoacizi a glicoproteinei spike a SARS-CoV-2 a identificat mai multe situsuri prestabilite în care BromAc ar putea acționa preferențial, cum ar fi situsul S2' bogat în legături disulfidice [31], împreună cu alte trei legături disulfidice în RBD [32]. În paralel, rolul scutului glicozidic de acoperire a spike-ului, care este predispus să fie îndepărtat de BromAc, a fost evidențiat ca element de stabilizare a tranzițiilor de conformație RBD, precum și ca mecanism de rezistență la răspunsul imunitar specific [5,33,34].
Celulele de mamifere prezintă la suprafața lor funcții reductive capabile să desființeze legăturile disulfidice, iar reglarea acestui echilibru tiol-disulfidic s-a dovedit a avea un impact asupra internalizării diferitelor tipuri de virusuri, inclusiv SARS-CoV-2 [8,35,36,36,37,38]. Atât ACE2, cât și proteinele spike posedă legături disulfidice. Atunci când toate legăturile disulfidice RBD ale proteinei spike au fost reduse la tioli, legarea receptorului ACE2 la proteina spike a devenit mai puțin favorabilă [8]. În mod interesant, reducerea legăturilor disulfidice ale ACE2 a indus, de asemenea, o scădere a legăturii [8]. Mai mult, alte rapoarte au sugerat că bromelaina singură ar putea inhiba infecția SARS-CoV-2 în celulele VeroE6 printr-o acțiune asupra legăturilor disulfidice [39,40]. Ca atare, pierderea infectivității SARS-CoV-2 observată după pretratarea cu BromAc ar putea fi corelată cu desfășurarea cumulativă a proteinelor spike și de înveliș, cu o reducere semnificativă a legăturilor disulfidice ale acestora de către acetilcisteină, demonstrată in vitro.
Este interesant faptul că un efect similar al BromAc a fost observat atât împotriva WT, cât și împotriva ∆S SARS-CoV-2. Principala diferență în ceea ce privește secvențele de aminoacizi dintre SARS-CoV-2 și SARS-CoV anterior este includerea unui situs de clivaj furin între domeniile S1 și S2 [41]. Acest situs distinct al proteinei spike și rolul său în spill-over-ul gazdei și în fitness-ul virusului este un subiect de mare dezbatere [41,42,43,44]. De remarcat, ∆S, care prezintă o mutație în acest nou situs de clivaj S1/S2 și care modifică motivul de clivaj, nu prezintă nicio diferență aparentă în ceea ce privește capacitatea de replicare în comparație cu tulpina WT. Sensibilitatea ușor crescută a ∆S la tratamentul cu BromAc nu se datorează, prin urmare, unei polarizări bazale a replicării, dar mutația ar putea fi probabil implicată în îmbunătățirea mecanismului de acțiune al BromAc. Aceste rezultate ar sugera totuși că, începând de la o doză de prag, BromAc ar putea fi potențial eficient asupra tulpinilor mutante cu spike. Acesta ar putea fi un avantaj clar pentru BromAc față de mecanismele imunologice specifice ale unei vaccinări specifice pentru spike [3,4].
Până în prezent, au fost testate diferite strategii de tratament, dar nicio moleculă nu a demonstrat un efect antiviral clar. În plus, având în vedere evoluția eterogenă a bolii la pacienții cu COVID-19, strategia de tratament ar trebui să combine mai multe mecanisme de acțiune și să fie adaptată la stadiul bolii. Astfel, reproiectarea tratamentului rămâne o strategie ideală împotriva COVID-19, în așteptarea unei acoperiri vaccinale suficiente la nivel mondial [45,46]. În special, dezvoltarea unui tratament timpuriu orientat spre nas, predispus să diminueze infectivitatea unui pacient și să prevină progresia spre forme pulmonare severe, este susținută de un raționament puternic. Hou et al. au demonstrat că primul loc de infecție este mucoasa nazofaringiană, cu deplasare secundară către plămâni prin aspirație [47]. Într-adevăr, modelul de infectare a celulelor tractului respirator a urmat expresia receptorului ACE2, scăzând de la tractul respirator superior la țesutul alveolar. Raportul pentru ACE2 a fost de cinci ori mai mare în nas decât în tractul respirator distal [40]. Au fost testate in vitro și alte tratamente de reprofilare ca antiseptic nazal, cum ar fi Povidona-Iodina, care a demonstrat activitate împotriva SARS-CoV-2 [48]. În studiul de față, am demonstrat potențialul terapeutic in vitro al BromAc împotriva SARS-CoV-2 cu o doză eficientă de prag la 100 µg/20 mg/mL. Deoarece modelele de siguranță pentru căile respiratorii animale la două specii nu au prezentat până în prezent nicio toxicitate (date nepublicate), scopul este de a testa administrarea nazală a medicamentului într-un studiu clinic de fază I (ACTRN12620000788976). Un astfel de tratament ar putea contribui la atenuarea infecțiilor ușoare și la prevenirea infectării persoanelor care intră în mod regulat în contact cu virusul, cum ar fi lucrătorii din domeniul sănătății.
Deși rezultatele noastre sunt încurajatoare, există o serie de aspecte care trebuie luate în considerare în ceea ce privește această demonstrație. Și anume, condițiile in vitro sunt fixe și ar putea fi diferite de cele in vivo. Orice reacție enzimatică este influențată de pH-ul mediului, și cu atât mai mult atunci când este vorba de reacții redox, cum ar fi reducerea legăturilor disulfidice [9]. pH-ul mucoasei nazale este, în termeni fiziologici, între 5,5 și 6,5 și crește în rinită la 7,2-8,3 [49]. Vârsta înaintată, des întâlnită în cazul infecțiilor simptomatice cu SARS-CoV-2, induce, de asemenea, o creștere a pH-ului mucoasei nazale [49]. O astfel de gamă de variație, în funcție de modificările induse în mod obișnuit de o infecție virală, poate pune la îndoială eficacitatea strategiei noastre de tratament. Alte experimente in vitro pentru a testa diverse condiții de pH sunt în curs de desfășurare, dar, în cele din urmă, numai studiile clinice vor putea evalua acest aspect. Experimentele noastre au fost conduse pe o linie celulară de rinichi de maimuță cunoscută ca fiind foarte permisivă la infectivitatea SARS-CoV-2. Cu ipoteza de mai sus privind întreruperea echilibrului tiol-disulfură de liză a proteinei S, eficacitatea BromAc asupra SARS-CoV-2 nu ar trebui să fie influențată de modelul proteazei membranare. Reproducerea acestui protocol experimental cu linia celulară epitelială pulmonară umană Calu-3 (ATCC® HTB-55™) ar permite abordarea acestor aspecte, deoarece intrarea virusului este dependentă de TMPRSS2 și independentă de pH, ca în epiteliul căilor respiratorii, în timp ce intrarea virusului în celulele Vero este dependentă de catepsina L și, prin urmare, de pH [50].
În general, rezultatele obținute în cadrul prezentului studiu, împreună cu studiile complementare privind proprietățile BromAc și caracterizarea SARS-CoV-2, relevă un indiciu puternic că BromAc poate fi dezvoltat într-un agent terapeutic eficient împotriva SARS-CoV-2.
5. Concluzii
În prezent, nu există un tratament terapeutic adecvat pentru SARS-CoV-2 în fază incipientă, menit să prevină progresia bolii. BromAc este în curs de dezvoltare clinică de către autori pentru cancerele mucinoase datorită capacității sale de a modifica structurile complexe ale glicoproteinei. A fost examinat potențialul BromAc asupra proteinelor de vârf și de înveliș ale SARS-CoV-2 stabilizate prin legături disulfidice și s-a constatat că acesta induce desfășurarea proteinelor recombinante de vârf și de înveliș prin reducerea punților stabilizatoare disulfidice. BromAc a arătat, de asemenea, un efect inhibitor asupra SARS-CoV-2 de tip sălbatic și mutant de tip "spike" prin inactivarea capacității de replicare a acestuia in vitro. Prin urmare, BromAc ar putea fi un agent terapeutic eficient pentru infecția timpurie cu SARS-CoV-2, în ciuda mutațiilor, și chiar ar putea avea potențial ca agent profilactic la persoanele cu risc ridicat de infecție.
Contribuții ale autorilor
Conceptualizare, J.A., K.P., S.J.V. și D.L.M.; metodologie, J.A., G.Q., K.P., S.B. și A.H.M.; validare, J.A., G.Q., K.P., V.K., S.B. și A.H.M.; investigare, J.A., G.Q., K.P., V.K., S.B. și A.H.M.; redactare - pregătirea proiectului original, G.Q., K.P., V.K., A.H.M., E.F. și S.J.V.; supervizare, D.L.M. și E.F.; administrarea proiectului, S.J.V.; obținerea de fonduri, S.J.V. și D.L.M. Toți autorii au citit și au fost de acord cu versiunea publicată a manuscrisului.
Finanțare
Această cercetare este finanțată parțial de Mucpharm Pty Ltd., Australia.
Declarație privind disponibilitatea datelor
Un preprint al acestui manuscris a fost arhivat pe www.biorxiv.org (accesat la 31 ianuarie 2021) datorită urgenței COVID-19.
V-ați vaccinat și medicul de la centru nu v-a prezentat posibilele reacții adverse? Reclamati-l la Colegiul Medicilor din România și din județul în care locuiți.
Ați spus medicului că ați avut probleme după vaccinare și v-a ignorat? Reclamați-l !
V-ați săturat să tot bateți la uși închise, să fiți refuzați, ignorați, plimbați pe la ușile cabinetelor medicilor de familie , din clinici, policlinici, spitale, laboratoare, vi s-au lungit urechile și vi s-au agravat afecțiunile așteptând cu orele , zilele, lunile sau chiar cu anii să vă vină rândul ? Reclamați-i !
V-ați saturat și să tot fie băgați în aceeași oală medicii care și-au păstrat integritatea, demnitatea și conștiința, riscându-și astfel cariera cu cei care încalcă flagrant și constant jurământul lui Hipocrat ?
Colegiul Medicilor din România probabil din lipsă de activitate, au făcut o fixație și o tot hărțuie pe D-na Dr. Hagima Geanina .
Haideți să le alungăm monotonia și să le dam de lucru sesizând toate situațiile în care medicii nu și-au făcut treaba pentru care sunt plătiți, făcând totodată de rușine breazla din care fac parte.
Sub linia punctată de mai jos vă pun la dispoziție un model (simplu și pe înțelesul tuturor) de "Plângere" către Colegiul Medicilor pe care să îl completați cu datele voastre, plângere prin care puteți sesiza situațiile în care ați fost puși de anumiți medici prezentând modul în care ați fost "tratați" ,...
Puteți adapta textul cum doriți inclusiv și pentru plângeri câte Consiliul pentru Combaterea Discriminării și către Protecția Consumatorului.
Faceți plângerile în care două exemplare și depuneți-le cu număr de înregistrare la registraturile acestor instituții și cereți să vi se dea înapoi un exemplar cu număr de înregistrare.
Dacă nu aveți posibilitatea să mergeți să depuneți fizic plângerile, trimiteți pe email la adresa office@cmr.ro și solicitați neapărat să vi se dea număr de înregistrare care să vă fie comunicat la adresa de e-mail pe care o veți trece în plângere.
Adresele de e-mail ale Colegiilor Medicilor fin județe le găsiți cu ușurință pe net.
După ce medicii cu "exces de zel" Vor fi chemați la "extemporale", nu își vor mai permite apoi să vă batjocorească după bunul lor plac.
..................................................
Către,
Colegiul Medicilor din ...................
DOMNULE PREȘEDINTE
Subsemnata/ Subsemnatul .........................., identificat/ ă cu CI/ BI seria ...., nr. ........, având CNP ................, cu domiciliul în localitatea ....................., str. ......................., nr. ........., bl. ......., scara ...........,
et. ......., ap. ........., sector/ județ .........................., telefon .........., email ........., adresă de corespondență (dacă locuiți la altă adresă decât cea din CI), formulez prezenta
PLÂNGERE
împotriva medicului ......................, specializarea ...................., cu cabinet medical la Policlinica/ Spitalul /Clinica /Laboratorul ..........................situat în localitatea ..............., str. ...................., nr. ................., sector/ județ ......................, pentru următoarele
Motive
În data de ................, în urma unei programări din data de ............, m-am prezentat la policlinica/ spitalul/cabinetul medical ................., pentru (consult, analize, etc)...................., unde medicul ............................................................... (descrierea detaliată a faptelor și indicarea motivelor și a prejudiciului cauzat).
Solicit cercetarea disciplinară a medicului...... și tragerea la răspundere/sancționarea acestuia pentru motivele mai sus precizate.
Anexez următoarele înscrisuri .................
Data :
Semnatura :
Abonați-vă la:
Postări (Atom)